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三种比色方法
发布时间:2010-12-22 点击次数:859次

比色方法一般有BCABradfordLowry 等几种方法。

Lowry 法:以zui早期的Biuret 反应为基础,并有所改进。蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比,Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;反应需要的时间较长;容易受到非蛋白物质的影响;含EDTATriton x-100ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。

BCABicinchoninine acid assay)法:这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ,后者与BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强,反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法,操作简单,敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。

Bradford 法:这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应,产生的有色化合物吸收峰595nm。其zui大的特点是,敏感度好,是Lowry BCA 两种测试方法的倍;操作更简单,速度更快;只需要一种反应试剂;化合物可以稳定1小时,方便结果;而且与一系列干扰LowryBCA 反应的还原剂(如DTT,巯基乙醇)相容。但是对于去污剂依然是敏感的。zui主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大,无可比性。